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PCR核酸檢測實(shí)驗(yàn)室根據(jù)國家《醫(yī)學(xué)生物安全二級實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)》進(jìn)行建設(shè),核酸檢測實(shí)驗(yàn)室共分為試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)四個區(qū)域。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)配置全自動核酸提取儀、實(shí)時熒光定量PCR儀、擴(kuò)增儀等儀器,消毒和防護(hù)設(shè)施齊全,符合相關(guān)生物實(shí)驗(yàn)室安全標(biāo)準(zhǔn)。此外,為防止實(shí)驗(yàn)室外的地方被污染,實(shí)驗(yàn)室的氣壓均為負(fù)壓,有效降低感染風(fēng)險。
實(shí)驗(yàn)室的三個區(qū)域試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)很重要。檢測人員們需要在一區(qū)配制好試劑,通過傳遞窗送至二區(qū),在二區(qū)進(jìn)行樣本核酸提取,之后再送到擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行基因擴(kuò)增反應(yīng),等待檢測結(jié)果……整個流程單向進(jìn)行。
在試劑準(zhǔn)備區(qū),檢測人員在超凈工作臺前手持鑷子和加樣槍,將三種不同劑量的試劑從一管管試劑瓶中抽出、混合,精準(zhǔn)加入96孔板……所有試劑配制完畢后,連同提取盒、加樣槍等統(tǒng)一放到連通一區(qū)和二區(qū)的傳遞窗里。待一區(qū)的窗門關(guān)好后,位于二區(qū)的操作人員才可以打開另一側(cè)的窗門,將試劑取出。
在二區(qū)進(jìn)行的提取加樣環(huán)節(jié),需要檢測人員直接面對樣本,在操作中會面臨氣溶膠傳染的風(fēng)險,是最關(guān)鍵也是最危險的一步,因此二區(qū)內(nèi)檢測人員必須嚴(yán)格三級防護(hù),戴雙層手套,在生物安全柜中操作。在“全副武裝”以及“負(fù)壓”的狀態(tài)下,進(jìn)行長時間、高強(qiáng)度的工作,對每個檢測人員來說,都是一項(xiàng)不小的體力考驗(yàn)。
為了快速、準(zhǔn)確地對人群進(jìn)行大面積篩選工作,同仁醫(yī)院檢驗(yàn)科采取“三人混檢”,一次同時進(jìn)行3份樣本混合檢測,如果混合樣本出現(xiàn)陽性,再分別對“混檢”的單一樣本進(jìn)行檢測。因此,在核酸提取加樣環(huán)節(jié),檢測人員需要先將所有樣本進(jìn)行雙份樣品標(biāo)記,再每三個一組,加入到盛有核酸提取試劑的96孔板,每個孔細(xì)密排列,每個加樣環(huán)節(jié)都以微升為單位,每一步操作,都要投入三倍的耐心和忍受力,容不得一點(diǎn)馬虎。
幾個小時后,全部樣本的核酸提取、與擴(kuò)增檢測試劑混合完畢,配置成 PCR 反應(yīng)體系,再經(jīng)傳遞窗到擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行核酸擴(kuò)增檢測。擴(kuò)增區(qū)內(nèi),3臺擴(kuò)增檢測儀高速運(yùn)轉(zhuǎn),電腦屏幕上,隨著一條條內(nèi)參曲線的出現(xiàn),檢測人員可以暫時放下懸著的心。如果樣本檢測為陽性,便會有兩項(xiàng)指標(biāo)呈現(xiàn)出S形曲線;如果檢測結(jié)果為陰性,結(jié)果顯示為一條直線。
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